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恒溫消解儀在蛋白質(zhì)測定中的應用
更新時間:2014-11-19   點擊次數(shù):2330次
 
  
  凱氏定氮法測定蛋白質(zhì)的含量,是zui常用的蛋白質(zhì)測定方法,但樣品的消解費事費時,一般一臺電爐一天zui多消化兩個樣品。我們采用恒溫消解儀進行蛋白質(zhì)消解,4~6小時可同時消化16個樣品。
  
  稱0.2-2.0g固體樣品或5-10g液體樣品于平底玻璃消化管中,加0.2g硫酸銅,3g硫酸鉀及20ml硫酸,稍搖勻后于管口放一小漏斗,置于恒溫消解儀中,300℃左右,小心加熱,一般2h內(nèi),管內(nèi)容物可全部炭化,泡沫*停止。將溫度降至240℃左右,分幾次向管內(nèi)共加10ml過氧化氫,提高溫度至390℃左右,繼續(xù)消化,至液體呈藍綠色澄清透明后,再繼續(xù)加熱30min,放冷后,定容100ml,混勻備用。取與處理樣品相同的硫酸銅、硫酸鉀、硫酸、過氧化氫按同一方法做試劑空白實驗。
  
  本方法全部消化過程約需4-6h,一次zui多可消化16個樣品。
  
  同時使用普通電爐進行蛋白質(zhì)消解,進行比較實驗。
  
  定氮測定
  
  按國家標準[1]中GB5009.5-85食品中蛋白質(zhì)的測定方法(4.3)微量定氮法進行操作。
  
  結(jié)果及討論
  
  樣品的用量:根據(jù)不同的蛋白質(zhì)含量,取0.2g-2.0g樣品,置消化管內(nèi)進行消解,在300℃初始消解無外溢現(xiàn)象。樣品先加酸放置過夜,可加快消解速度。開始消解時,由于消解溫度恒定,消解管整體受熱均勻,一般泡沫不能溢出管外,較直接電爐消解容易控制。
  
  消解溫度:初始消解時溫度不可過低,過低造成消化時間延長。實驗證明初始消解溫度300℃為宜。只要消解管內(nèi)無泡沫產(chǎn)生,應及時把溫度提高到390℃左右,以加快消解速度。
  
  
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